ПРИНЦИП И ВАРИАНТЫ МЕТОДА

Метод иммунофильтрации основан на том, что смесь антигенов подвергается электрофорезу в агаре сквозь фракцию у-глобулина, содержащую антитела ко всем компонентам смеси, кроме изучаемого антигена. Антитела служат как бы специфическим «фильтром», пропускающим лишь тот антиген, антител к которому не содержится в «фильтре». Проявление спектра антигенов, подвергшихся и не подвергшихся иммунофильтрации, с помощью иммунных сывороток позволяет выявить антиген, прошедший сквозь «фильтр» антител и определить его положение в им-муноэлектрофоретическом спектре исследуемой системы.

Сочетание иммунофильтрации с простым электрофорезом в агаре дает возможность выявить путем окраски зону «профильтрованного» антигена, локализовать ее на электрофореграмме, провести количественные измерения и характеристические реакции.

Варианты метода применительно к антигенам различной электрофоретической подвижности

Из самого принципа метода иммунофильтрации следует, что он применим лишь в тех случаях, когда возможно создать встречное движение антигенов и антител в агаре. Чем меньше разрыв в электрофоретической подвижности между антигеном и антителом, тем меньше эффективность иммунофильтрации, а при равенстве их электрофоретических подвижностей метод в обычном варианте вообще неэффективен.

Трудности обычно возникают при работе с антигенами, элек-трофоретическая подвижность которых равна или ниже подвижности сывороточных р j-глобулинов, а с антигенами, имеющими подвижность туглобулинов, иммунофильтрацию провести невозможно. Однако простые модификации метода позволяют обойти указанные выше трудности и ограничения. Для иммунофильтрации антигенов, подвижность которых превышает подвижность y2-глобул и нов, но меньше скорости электроосмотического потока в обычных сортах агара, например в агаре «Дифко», можно воспользоваться специальным агаром — ионагаром № 2 фирмы «Oxoid». В этом агаре при обычных условиях электрофореза скорость электроосмотического потока значительно ниже, чем в «Дифко», и к катоду переносятся только т2-глобу-лины, в то время как все остальные компоненты сыворотки мигрируют к аноду. Очевидно, что, применяя ионагар № 2, можно без каких-либо модификаций работать со всеми антигенами, кроме антигенов, не отличающихся по подвижности от глобулинов.

В последнем случае было предложено использовать в качестве «фильтра» антитела, конъюгированные диазосочетанием с арсаниловой кислотой. Такие антитела резко увеличивали свою электрофоретическую подвижность и мигрировали в зоне сывороточных ее-глобулинов. Они не теряли способности соединяться с антигенами и могли служить эффективным фильтром, например, для разделения смеси у2-глобулинов животных разных видов.

Таким образом, модификации основного принципа позволяют применять метод иммунофильтрации к антигенам любой электрофоретической подвижности.

Иммунофильтрации с возвращением реагирующих компонентов в исходное положение (иммунофильтрации антител)

Несколько отличным вариантом иммунофильтрации является метод иммунофильтрации антител, основанный на принципе встречного электрофореза антигенов и антител с последующим возвращением обоих компонентов в исходное положение.

В данном методе минимальная доза антител к исследуемому антигену мигрирует через длинный резервуар, заполненный испытуемым препаратом, заключенным в агар. Когда антитела достигают конца резервуара, полюса переключаются и все компоненты возвращаются в исходное положение. После возвращения антител в исходный резервуар они испытываются на полноту истощения к исследуемому антигену.

В этом варианте иммунофильтрации проводится как бы смешивание микрокапли сыворотки с 15—20-кратным объемом анти гена, после чего сыворотка вновь отделяется от антигена, не разбавленная и не загрязненная этим антигеном.

Если использовать для электрофореза предельно разведенные антисыворотки, то можно повысить чувствительность метода преципитации в агаре более чем в 10 раз.

Принципиальным ограничением метода иммунофильтрации антител является его применимость только к антигенам с подвижностью, существенно превышающей подвижность у-глобулина.

Медицинские советы Марии Струбциновой